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熒光定量PCR儀的理論模式講述

更新時間:2017-07-28瀏覽:2093次
  熒光定量PCR儀以參照物為標準,對PCR終產(chǎn)物進行分析或?qū)CR過程進行監(jiān)測,從而達到評估樣本中靶基因的拷貝數(shù),稱為定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR擴增的指數(shù)期進行的。
  PCR是對原始待測模板核酸的一個擴增過程,任何干擾PCR指數(shù)擴增的因素都會影響擴增產(chǎn)物的量,使得PCR擴增終產(chǎn)物的數(shù)量與原始模板數(shù)量之間沒有一個固定的比例關(guān)系,通過檢測擴增終產(chǎn)物很難對原始模板進行準確定量。近年來研究人員通過大量的實踐,研究了相對準確的定量PCR方法,即熒光定量PCR儀的熒光定量PCR。
  PCR擴增通式:
  1.Tn=T0(1+E)n;
  2.Tn=Tn-1(1+E)n。
  注:其中E表示擴增效率,n為循環(huán)數(shù),Tn表示在n個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量,Tn-1表示在n-1個周期后PCR產(chǎn)物的數(shù)量,T0為原始模板數(shù)量。設(shè)定PCR到達指數(shù)擴增期時,產(chǎn)生一定的熒光高于背景為儀器所識別,此時的循環(huán)數(shù)為CP,也就是K=T0(1+E)CP,取對數(shù)即:
  lg K=lg T0+CP*lg(1+E);
  CP=-1/lg(1+E)*lg T0+lgk/lg(1+E)。
  由于對一特定的PCR而言,E與K均為常數(shù),故上式為循環(huán)數(shù)(CP)對原始模板拷貝數(shù)的對數(shù)(lg T0)一次方程,其標準形式y(tǒng)=kx+b,該直線的斜率為-1/lg(1+E),在橫坐標上的截距為lgk/lg(1+E),也是熒光定量PCR儀所謂的標準曲線。
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